實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
乳腺癌是一種嚴重影響女性健康甚至危及生命的惡性腫瘤之一，其發(fā)展不僅是腫瘤細胞本身的作用，而且與腫瘤微環(huán)境密切相關。
癌組織由實質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細胞構(gòu)成癌實質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營養(yǎng)癌實質(zhì)的作用，不具有特異性。
當實體瘤超過 1-2mm時，需要通過新生的血管和活化的癌相關成纖維細胞來獲取癌細胞生長和增殖所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關成纖維細胞可通過分泌多種細胞因子和生長因子來發(fā)揮促進癌血管**的作用。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
|
乳腺癌組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1388 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于人乳腺癌組織。
2)細胞鑒定：Vimentin熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：梭形細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
甘油含量測試盒測定組織樣本 100T 微量酶標法
INO80E蛋白抗體
INO80E
錨蛋白重復域6抗體
ANKRD6
小鼠CD44分子(CD44)elisa檢測試劑盒免費代測
兩步法RT－PCR熒光定量試劑盒
細胞AKT蛋白表達比色法定量檢測試劑盒
植物花色苷測試盒
MPP4蛋白抗體
MPP4
20號染色體開放閱讀框11抗體
C20orf11
腫瘤蛋白p53誘導蛋白13(腫瘤抑制基因) Anti-TP53I13
維甲酸受體γ抗體 Anti-RAR gamma/Retinoic Acid Receptor gamma
孤菲肽受體/痛敏肽受體抗體 Anti-Nociceptin receptor
血管非炎癥分子1抗體 Anti-VNN1
扭轉(zhuǎn)原腸胚形成源蛋白1抗體
TWSG1
過氧化物酶體2抗體
DECR2
炎癥負調(diào)控因子蛋白抗體 Anti-SELS
鋅指蛋白339抗體 Anti-OVOL2/ZNF339
磷酸化磷酯酶Cγ2抗體 Anti-Phospho-PLC gamma 2(Tyr753)
先心病相關蛋白TBX1抗體 Anti-TBX1/Brachyury
大鼠高靈敏度促甲狀腺(U-TSH)elisa分析檢測試劑盒
人乳腺癌相關成纖維細胞小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7)elisa檢測試劑盒
人變腎上腺素(MN)elisa檢測試劑盒
Beta-coat protein; betacop; Coatomer beta subunit; Coatomer protein complex subunit beta 1; Coatomer protein complex subunit beta; Coatomer subunit beta; COPB; COPB1; DKFZp761K102; FLJ10341; COPB_HUMAN.
人乳腺癌相關成纖維細胞
人頸靜脈球瘤細胞
人前列腺癌細胞；LAPC4
NIT-1小鼠胰島素瘤β細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。