操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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重組人胰島素 |
1g |
FS-X020054 |
產品名稱：重組人胰島素
英文名稱：rh Insulin
貨號：BH-X020054
規(guī)格：1g
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。
（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
葡萄糖瓊脂 250(g)
改良麥康凱肉湯基礎（CT-MAC） 250(g)
三糖鐵瓊脂（TSI） 250(g)
7.5%氯化鈉肉湯 250(g)
Fraser肉湯基礎 250(g)
檢定培養(yǎng)基6號 250(g)
沙門氏顯色培養(yǎng)基（SA） 1000mL/瓶
重組人胰島素神經束蛋白(NFASC)elisa檢測試劑盒英文名稱：NFASC ELISA Kit，英文縮寫：NFASC，產品別名：神經束蛋白(NFASC)ELISA檢測試劑盒，神經束蛋白(NFASC)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
妊娠帶蛋白(PZP)elisa檢測試劑盒英文名稱：PZP ELISA Kit，英文縮寫：PZP，產品別名：妊娠帶蛋白(PZP)ELISA檢測試劑盒，妊娠帶蛋白(PZP)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)elisa檢測試劑盒英文名稱：MFGE8 ELISA Kit，英文縮寫：MFGE8，產品別名：乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)ELISA檢測試劑盒，乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)elisa檢測試劑盒英文名稱：CCL3L1 ELISA Kit，英文縮寫：CCL3L1，產品別名：趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)ELISA檢測試劑盒，趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
橋粒芯膠粘蛋白3(DSC3)elisa檢測試劑盒英文名稱：DSC3 ELISA Kit，英文縮寫：DSC3，產品別名：橋粒芯膠粘蛋白3(DSC3)ELISA檢測試劑盒，橋粒芯膠粘蛋白3(DSC3)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
前膠原C端蛋白酶增強子1(PCPE1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PCPE1 ELISA Kit，英文縮寫：PCPE1，產品別名：前膠原C端蛋白酶增強子1(PCPE1)ELISA檢測試劑盒，前膠原C端蛋白酶增強子1(PCPE1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
平足蛋白(PDPN)elisa檢測試劑盒英文名稱：PDPN ELISA Kit，英文縮寫：PDPN，產品別名：平足蛋白(PDPN)ELISA檢測試劑盒，平足蛋白(PDPN)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
凝血酶/抗凝血酶復合體(TAT)elisa檢測試劑盒英文名稱：TAT ELISA Kit，英文縮寫：TAT，產品別名：凝血酶/抗凝血酶復合體(TAT)ELISA檢測試劑盒，凝血酶/抗凝血酶復合體(TAT)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
內收蛋白2(ADD2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ADD2 ELISA Kit，英文縮寫：ADD2，產品別名：內收蛋白2(ADD2)ELISA檢測試劑盒，內收蛋白2(ADD2)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
鈉/葡萄糖協同轉運蛋白3(SGLT3)elisa檢測試劑盒英文名稱：SGLT3 ELISA Kit，英文縮寫：SGLT3，產品別名：鈉/葡萄糖協同轉運蛋白3(SGLT3)ELISA檢測試劑盒，鈉/葡萄糖協同轉運蛋白3(SGLT3)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
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